- Aký je rozdiel medzi monoklonálnymi a klonálnymi protilátkami?
- Klonálne protilátky sú monošpecifické-podobne ako monoklonálne. Zakladným rozdielom medzi týmito dvoma skupinami protilátok je to, že klonálne protilátky rozpoznávajú výhradne veľmi špecificky vyselektované lineárne epitopy na molekule antigénu po jeho veľmi detailnej proteomickej analýze.
Oproti tomu, monoklonálne protilátky rozpoznávajú veľmi často stérické epitopy, ktoré často pri ich detekcii menia konformáciu a tým sa príslušná monoklonálna protilátka stane nešpecifickou, menej avidnou, alebo aj v extréme nefunkčnou.
- Aký je rozdiel medzi dvoma rôznymi klonálnymi protilátkami pre ten istý antigén?
- Niektoré antigény majú viac špecifických lineárnych epitopov, ktoré môžu byť rozpoznávané korešpondujúcou klonálnou protilátkou viac alebo menej intenzívne, záleží od testovanej patológie, materiálu, pacienta a pod. V tomto prípade vyvíja DB Biotech 2-3 klonálne protilátky charakterizujúce rozdielne lineárne epitopy na tom istom antigéne. Je na zákazníkovi aby si tieto klonálne protilátky otestoval a vybral, ktorá z nich sa lepšie hodí pre ten ktorý študovaný model/aplikáciu.
- Aké sekundárne protilátky je potrebné používať s klonálnymi protilátkami?
- Odporúčame použiť DB detekčný systém, alebo vo všeobecnosti anti-zajačie imunoglobulíny, či už nekonjugované alebo konjugované, podľa aplikácie protilátky.
- Používajú sa klonálne protilátky na tie isté aplikácie ako polyklonálne a monoklonálne protilátky?
- Áno s tým rozdielom, že klonálne protilátky sú podstatne špecifickejšie ako polyklonálne, teda sú použiteľne aj pri veľmi citlivých aplikáciách kde je základom absolútna špecificita – napríklad v klinickej diagnostike.
Klonálne protilátky sú porovnateľné s monoklonálnymi s tým, že rozpoznávajú výhradne lineárne epitopy, pričom ich špecificita, afinita a avidita aj pri možnej zmene konformácie antigénu ostáva nemenná.
- Sú králičie klonálne protilátky DB Biotech podobné imunoafinitne purifikovaným polyklonálom?
- Nie. Imunoafinitne purifikované polyklonálne protilátky (či už je imunogénom celý proteín alebo vyselektovaný peptid) sú stále reprezentované viacerými frakciami imunoglobulínov, ktoré odpovedajú všetkým epitopom v sekvencii imunogénu. Klonálna králičia protilátka je homogénnou frakciou IgG, ktorá odpovedá výhradne jedinému, jasne definovanému epitopu molekuly antigénu.
- Využíva klonálna technológia DB Biotech hybridómové bunkové línie?
- Nie, klonálne protilátky sa získavajú z králičích antisér in vitro klonovacou technológiou, ktorá je majetkom DB Biotech.
- Je možné používat CE IVD registrované protilátky aj na aplikácie v oblasti výskumu (research use)? Aké sú v takom prípade odporúčané riedenia pre WB či ELISA?
- Len v špeciálnych prípadoch. Protilátky pre IHC-P aplikáciu sú dizajnované s prihliadnutím na silnú denaturáciu príslušného antigénu. Ak je vyselektovaný epitop konformačne nezmenený aj za podmienok jemnej denaturácie, alebo uchovanie natívnej štruktúry daného antigénu, je možné použitie protilátky aj pre western blot alebo ELISA. Ohľadne riedení pre konkrétne protilátky nás kontaktujte.
- Prečo ponúka DB Biotech rôzne klony tej istej protilátky pre aplikáciu vo výskume (western blot, imunoprecipitácia, ELISA) a v klinickej diagnostike (IHC-P)?
- Pre IHC-P aplikáciu je potrebné pri dizajne protilátky brať do úvahy silnú, ireverzibilnú denaturáciu antigénu vrátane zmien konformácie konkrétneho epitopu, voči ktorému je klonálna protilátka produkovaná.
Vo väčšine prípadov bude tento epitop volený na základe rozdielnych konformačných kritérií ako by to bolo v prípade aplikácie pre western blot, alebo ELISA kde je zachovaná pôvodná štruktúra antigénu, alebo dochádza k podstatne miernejšej denaturácii. Až na vzácne výnimky sú preto pre rôzne aplikácie dizajnované rôzne epitopy a voči nim sú potom produkované rozdielne klonálne protilátky charakterizujúce rozdielne epitopálne sekvencie molekuly cieľového proteínu.